標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)一直是藥品質(zhì)量控制特別是純度和含量分析的重要選擇，但標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的供需矛盾，如有些雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)不易獲取以及多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)同時(shí)使用所帶來的高昂檢測成本等限制了標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的實(shí)際應(yīng)用。為解決這一問題，替代方法應(yīng)運(yùn)而生，高效液相色譜(HPLC)校正因子法便是其中之一。

該方法起初主要用于HPLC有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)對于特定雜質(zhì)的定量，進(jìn)而又逐漸用于中藥多指標(biāo)含量的測定，發(fā)展至今相對校正因子用于雜質(zhì)的定量或者中藥多組分活性成分的定量方法已經(jīng)得到廣泛的應(yīng)用，但是其在使用過程中還存在一些問題需要統(tǒng)一或者規(guī)范，其在中藥方面的應(yīng)用已經(jīng)有多人對相應(yīng)的技術(shù)要求進(jìn)行過建議和總結(jié)，但在雜質(zhì)定量研究方面相關(guān)報(bào)道甚少，因此本文將文獻(xiàn)中相對校正因子在雜質(zhì)定量方面應(yīng)用存在的一些問題進(jìn)行了總結(jié)。

曲線是否需要強(qiáng)制過原點(diǎn)

對于色譜方法，校正曲線的斜率b=0是一種理想的狀態(tài)，事實(shí)上由于每一臺儀器都有其檢測限度，需要待分析物達(dá)到一定濃度水平以后才能檢測出信號，以及溶劑干擾等系統(tǒng)誤差的存在，因此截距一般不會為0。

正的Y軸截距表示高濃度響應(yīng)的飽和度或響應(yīng)處有干擾存在，負(fù)的截距說明可能方法靈敏度有問題，或被分析物質(zhì)殘留在容器或者HPLC系統(tǒng)中。但是標(biāo)準(zhǔn)曲線法使用斜率求取校正因子的前提是假設(shè)截距b=0，由此可見無論是否對截距進(jìn)行校正，這種方法對于相對校正因子的測定都會產(chǎn)生一定的誤差。

目前對于標(biāo)準(zhǔn)曲線法求校正因子的截距和斜率未檢索到明確的要求。因此文獻(xiàn)對于校正曲線的處理也有兩種方法，一種是將截距校正為0；大部分則未做校正。但校正因子在中藥方面的應(yīng)用中有一些相關(guān)要求的報(bào)道，如校正曲線相關(guān)系數(shù)r不得低于0.999，k/b值大于100時(shí)，b值可以忽略不計(jì)。

實(shí)例證明在中藥多組分含量測定中采用截距校正后的曲線斜率求相對校正因子方法最為合理。但截距校正與否對校正因子計(jì)算會產(chǎn)生多大的影響，哪一種方式計(jì)算得到的雜質(zhì)含量更為準(zhǔn)確未見文獻(xiàn)報(bào)道。

校正曲線濃度范圍的選擇

在進(jìn)行雜質(zhì)定量方法驗(yàn)證時(shí)，線性驗(yàn)證是方法驗(yàn)證中不可少的一項(xiàng)內(nèi)容，由于在驗(yàn)證過程中要分別建立雜質(zhì)和主成分濃度和響應(yīng)值之間的校正曲線，可以就此以兩校正曲線的斜率計(jì)算出相對校正因子，因此很多研究對于校正曲線濃度的范圍便遵從線性驗(yàn)證的要求從定量限到限度值的120%～150%。也有專家建議標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定校正因子的濃度范圍要涵蓋定量限和標(biāo)準(zhǔn)限度。

從目前檢索到的文獻(xiàn)看，有些文獻(xiàn)的確涵蓋了定量限和標(biāo)準(zhǔn)限度，有些則僅涵蓋限度或未明確定量限，其中一些文獻(xiàn)上限定了限度水平的200%甚至500%，高濃度范圍對于溶液的配制可能更為簡單，低濃度范圍則更加接近正常雜質(zhì)檢測水平，不同濃度范圍所得到校正因子是否有所差別未檢索到文獻(xiàn)報(bào)道。

校正曲線上濃度點(diǎn)的選擇

在計(jì)算相對校正因子時(shí)，多采用線性驗(yàn)證時(shí)的校正曲線，因此一般要求至少制備5份不同濃度的對照品溶液用于校正曲線的繪制。在配置不同濃度的對照品溶液時(shí)應(yīng)盡量采用逐級稀釋,在校正曲線上的點(diǎn)也應(yīng)均勻分布，也有一些文獻(xiàn)濃度點(diǎn)分布并不均勻，如在低濃度處選點(diǎn)更加密集，曲線上濃度分布對校正因子的測定是否產(chǎn)生影響未見文獻(xiàn)報(bào)道。

涉及校正因子的方法開發(fā)與驗(yàn)證

目前對于雜質(zhì)與主成分相對校正因子的測定多在進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)方法線性驗(yàn)證時(shí)直接以校正曲線的斜率順帶求得，僅在《中國藥典》2015年版四部《9101藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則》中明確規(guī)定了校正因子需進(jìn)行準(zhǔn)確度驗(yàn)證，但對于測定校正因子的方法開發(fā)以及耐用性驗(yàn)證沒有明確的要求。

在檢索到的有關(guān)化學(xué)藥品具體品種校正因子的26篇相關(guān)文獻(xiàn)中，有16篇文獻(xiàn)在計(jì)算相對校正因子時(shí)考慮到了儀器、色譜柱的相關(guān)影響，以在不同儀器不同色譜柱上測定得到的均值作為校正因子；有11篇文獻(xiàn)進(jìn)行了校正因子的耐用性驗(yàn)證，但驗(yàn)證項(xiàng)目不一，主要涉及人員、實(shí)驗(yàn)室、儀器、色譜柱、流動相pH值和比例、流速、試劑等級、柱溫、粒徑等多個(gè)影響因素，其中檢測波長、色譜柱、柱溫、流速都被報(bào)道過對校正因子測定結(jié)果有顯著影響。

由此可見，應(yīng)該在方法開發(fā)時(shí)對于特定雜質(zhì)相對校正因子的耐用性根據(jù)具體情況進(jìn)行全面考察，如果校正因子發(fā)生明顯變化，應(yīng)對具體測試條件在方法標(biāo)準(zhǔn)中加以嚴(yán)格設(shè)定，這樣相對校正因子才能作為一個(gè)常數(shù)，直接載入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)用于雜質(zhì)的準(zhǔn)確定量。

隨著大眾對于藥品安全性認(rèn)識和需求的不斷提高，藥品有關(guān)物質(zhì)檢查中進(jìn)行特定雜質(zhì)控制會逐漸成為藥品質(zhì)控的常態(tài)，標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)無法及時(shí)供應(yīng)的情況下，采用相對校正因子計(jì)算特定雜質(zhì)的方法也會越來越普遍。相對校正因子將成為藥品HPLC方法中用于雜質(zhì)含量測定和限度檢查過程中一個(gè)重要的參數(shù)。