高效液相色譜儀(HPLC)是在經(jīng)典的液相色譜法基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,其以液體作為流動(dòng)相,并采用顆粒非常細(xì)的高效固定相的柱色譜分離技術(shù)。其分離機(jī)制與常規(guī)柱色譜相同,但填料更加精細(xì),需高壓泵推動(dòng),柱效高,分析速度快。
高效液相色譜法的應(yīng)用范圍十分廣泛,對(duì)樣品的適用性廣,不受分析對(duì)象揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制,幾乎所有的化合物包括高沸點(diǎn)、極性、離子型化合物和大分子物質(zhì)均可用高效液相色譜法分析測(cè)定。經(jīng)過(guò)30多年的迅速發(fā)展,高效液相色譜法在基礎(chǔ)理論、儀器裝置和色譜柱等方面的研究已趨于成熟,現(xiàn)已成為化學(xué)化工、環(huán)境、藥學(xué)、食品等多個(gè)領(lǐng)域中非常具優(yōu)勢(shì)的分離分析方法之一。
高效液相色譜儀的主要性能有以下幾點(diǎn):
高壓——壓力可達(dá)150~300 kg/cm2。色譜柱每米降壓為75 kg/cm2以上。
高速——流速為0.1~10.0 mL/min。
高效——塔板數(shù)可達(dá)5000/米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。
高靈敏度——紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。
HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn):
速度快——通常分析一個(gè)樣品在15~30 min,有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。
分辨率高——可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到更佳分離效果。
靈敏度高——紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng,熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。
這里引申說(shuō)明一下,一臺(tái)品質(zhì)較好的高效液相色譜儀應(yīng)從主要技術(shù)指標(biāo)(主要是分析樣品的穩(wěn)定性),系統(tǒng)操作的便利性,整套系統(tǒng)統(tǒng)一性這三個(gè)方面進(jìn)行評(píng)估。
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